PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, TINCIONES Y MORFOLOGIA MICROSCOPICA D

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PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS, TINCIONES Y MORFOLOGIA MICROSCOPICA D
  1. al ser los microorganismos trasparentes, se deben teñir a los microorganismos con compuestos que se fijen a sus estructuras y les confieran color, estos compuestos son los colorantes.
    1. Los resultados de las tinciones y de los cultivos deben combinarse con resultados de pruebas bioquímicas.
      1. Para la tinción de las bacterias se pueden utilizar tinciones simples, diferenciales y selectivas
        1. Las primeras son aquellas en las cuales se utiliza un solo colorante y éste tiñe todo el protoplasma de la célula, observándose ésta de un solo color uniforme. Las tinciones diferenciales son aquellas en las cuales se utilizan dos colorantes y generalmente un mordente (compuesto que permite fijar el colorante a un material) que permiten establecer dos grupos de bacterias, uno que acepta el primer colorante y otro que acepta el segundo colorante, lo que le da un valor en la clasificación celular (ejemplo: Tinción de Gram y Tinción de Ziehl Neelsen).
          1. Cuando teñimos una bacteria requerimos hacer un frotis
            1. es decir requerimos colocar una pequeñísima muestra de una colonia bacteriana o una pequeña gota de un cultivo líquido, sobre un portaobjetos, extenderla, dejarla secar y fijarla. En este punto podemos teñir a nuestra bacteria y hacer la observación al microscopio para conocer la morfología que pueden tener los diferentes organismos. Debido al tamaño de las bacterias, todas las observaciones se realizan al microscopio con el objetivo de inmersión.
              1. Las pruebas bioquímicas
                1. evalúan las propiedades metabólicas de un microorganismo aislado, las cuales son únicas para cada especie.
                  1. La combinación de pruebas bioquímicas puede utilizarse para determinar el patrón bioquímico del microorganismo aislado. Esto hace posible la identificación del mismo utilizando un esquema de identificación. La identificación de un microorganismo es especialmente importante en el área clínica debido a que, al conocer la identidad del patógeno se puede determinar la susceptibilidad a algún antibiótico, lo cual es esencial para determinar un tratamiento médico efectivo.
                    1. Existen tres métodos de identificación: a) método convencional; b) sistemas multiprueba y c) métodos automatizados.
            2. técnica de Gram
              1. La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.
                1. Stern y Stearn los microorganismos grampositivos tienen una escala isoeléctrica de pH inferior a la de los microorganismos gramnegativos; y, a base de sus datos experimentales, deducen las siguientes conclusiones: • Los microorganismos grampositivos pueden hacerse gramnegativos al aumentar la acidez. • Los microorganismos gramnegativos pueden hacerse grampositivos al aumentar la alcalinidad. • Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la alcalinidad. • Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la acidez. • En la zona isoeléctrica característica de cada especie es muy escasa la tendencia a retener cualquier colorante. • Parece estar bien demostrado que las proteínas de las bacterias no son simples, sino más bien una débil combinación de sustancias proteínicas con otras lipoideas o grasas. • La materia grasa extraída de los microorganismos grampositivos difie
                  1. • Teoría de Libenson y Mcllroy Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retención o el escape del colorante.
        2. Un colorante es un compuesto orgánico que tiene grupos cromóforos y auxocromos unidos a anillos bencénicos, conformando lo que se conoce como un cromógeno. Los grupos cromóforos son radicales que le confieren la propiedad de color a los anillos bencénicos. El auxocromo es un radical que imparte al compuesto la propiedad de disociación electrolítica, permitiendo con esto la fijación del compuesto a diferentes materiales.

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