Caso 6. Metodologías convencionales para la detección de hongos y levaduras en cereales y/o productos de panificación

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• Metodología convencional para la detección de hongos y levaduras en alimentos

• Preparación de la muestra

• Tomar una muestra representativa de 25-50 g

• Agregar 10g + 90mL diluyente de peptona y homogenizar en Stomacher durante 2 min.

• Hacer las diluciones apropiadas 1:10 (1 + 9) en agua con peptona al 0,1%. Deben bastar diluciones de 10 -6 

• Metodología

• Metodología según: NOM-111-SSA1-1994

• Metodología según: BAM Capítulo 18

• Colocar por duplicado en cajas Petri 1 ml de la muestra líquida directa o de la dilución primaria, utilizando pipeta estéril.

• Verter de 15 a 20 ml de agar papa dextrosa acidificado, fundido y mantenido a 45 ± 1 °C en un baño de agua. No deben pasar más de 20 min desde que se prepara hasta que se vierte.

• Mezclar el medio con 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en el sentido contrario y seis de atrás para adelante, sobre una superficie lisa. Dejar que la mezcla se solidifique dejando las cajas Petri reposar sobre una superficie horizontal fría.

• Preparar una caja control con 15 ml de medio, para verificar la esterilidad.

• Invertir las cajas y colocarlas en la incubadora a 25 ± 1°C

• Contar las colonias de cada placa después de 3, 4 y 5 días de incubación. Después de 5 días, seleccionar aquellas placas que contengan entre 10 y 150 colonias

• Considerar las cuentas de placas con 10 a 150 colonias como las adecuadas para el informe. Multiplicar por el inverso de la dilución, considerando los criterios de la NOM-092-SSA1-1994 y reportar como UFC/g o ml

• Método extensión en placa

• Método vertido en placa

• Pipetear asépticamente 0,1 ml de cada dilución en placas de agar DRBC solidificadas previamente vertidas 

• Esparcir el inóculo con una varilla de vidrio doblada estéril.

• Colocar cada dilución en una placa por triplicado.

• Utilizar una pipeta estéril con tapón de algodón para colocar porciones de 1,0 ml de la dilución de la muestra en placas de Petri

• Añadir inmediatamente 20-25 ml de agar DG18 templado

• Mezclar el contenido girando suavemente los platos en el sentido de las agujas del reloj y luego en el sentido contrario

• Agregar agar dentro de 1-2 minutos; de lo contrario, la dilución puede comenzar a adherirse al fondo del plato

• Desde la preparación de la primera dilución de la muestra hasta el vertido o el recubrimiento de la placa final, no deben transcurrir más de 20 minutos

• Incubar las placas en la oscuridad a 25 ° C.

• Contar las placas después de 5 días de incubación. Si no hay crecimiento a los 5 días, vuelva a incubar durante otras 48 h.

• Cuente las placas que contienen de 10 a 150 colonias.

• Reportar como UFM/g o ml.  *Si el tercer dígito es 6 o más, redondee al dígito anterior (456 = 460) *Si es 4 o menos, redondee al dígito inferior (454 = 450) *Si el tercer dígito es 5, redondee al dígito siguiente si los primeros 2 dígitos son un número par (445 = 440) *Redondee al dígito anterior si los primeros 2 dígitos son un número impar (455 = 460)

• Cuando las placas de todas las diluciones no tengan colonias, informe los recuentos de moho y levadura como menos de 1 veces la dilución más baja utilizada.

• Metodologias convencionales  (Tabla)

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