Biología Molecular

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Conceptos importantes en el estudio de Biología Molecular
Auxy Fernandez
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La unidad básica de los ácidos nucléicos (AN) es el nucleótido. Cada nucleótidos está formado por tres componentes... fosfórico + azúcar + base nitrogenada
Si un nucleótido no tiene fosfato se le denomina... Nucleósido (azúcar + Base nitrogenada (NB))
A pH 7 los grupos fosfatos de los nucleótidos están... Ionizados: carga negativa que confiere carácter ácido a la molecula. es neutralizada por la interacción de cargas positivas de proteínas (histonas) de iones metálicos o de poliaminas.
la ribosa es el constituyente de ácidos nucleícos y se halla... en forma de beta-furanosa (anillo pentagonal cerrado). dos tipos: 1. Ribosa --> RNA 2. Desoxi-Ribosa --> DNA
Uniones de la ribosa a otras moléculas... C5' --> punto de unión con su grupo fosfato C3' --> unión con el fosfato de nt entrante por enlace fosfodiéster 5'-3' C1'--> unión mediante enlace N-beta-glucosídico con la BN (en N9 de base púrica o N1 en pirimidínica).
El anillo de pentosa no es plano: distintas conformaciones... C-2' endo (sur): C2' y C5' en el mismo lado (tipida DNAb) C-3' endo (norte): C3' y C5' en el mismo lado: RNA y DNAa Exo C2' o C3': distinto lado que C5'
Las bases nitrogenadas son compuestos... débilmente básicos y nitrogenados.
Las Bases nitrogenadas pueden ser de dos tipos.. Púricas: Adenina (A), guanina (G), ... Pirimidínicas: Citosina (C), Timina (T), Uracilo (U).
La degradación de las BN púricas dan lugar a... hipoxantina, xantina y ácido úrico
La Pirimidina Timina (T) es ... una base específica del DNA (raramente está en RNA)
La pirimidina Uracilo es.. una base específica del RNA (raramente en DNA)
La degradación de pirimidinas da lugar a... beta-Alanina y a beta-aminoisobutirato
Las bases púricas.. ADENINA: A: 6-amino-purina GUANINA: G: 2-amino-6-oxo-purina (la de mayor peso molecular)
Las bases pirimidínicas.. TIMINA: T: tiene un uracilo metilado CITOSINA: C: es como una citosina desaminada
Los puntos de unión con C1'-ribosa (enlace N glucosídico) son en purinas y pirimidinas en los N... N9 en purinas N1 en pirimidinas
Según el tipo de nucleósido/nucleótido la BN se denomina...
las bases nitrogenadas absorben luz a... 260 nm medir-cuantificar cantidad de AN en una solución por espectrofotoscropía
En los AN, las BN pueden interacción entre sí de dos maneras... 1. AN: monocatenario: interacciones hidrofóbicas: Van der waals, dipolo-dipolo : paralelos a los planos de anillos de las BN: apilamiento de BN (stacking) 2. AN: bicaternario: tb por puentes de H intercatenarios: entre amino de una BN y el carbonilo de BN de otra cadena.
Bases minoritarias, alteradas o secundaria de AN son... En DNA: formas metiladas (5-metild-citdosina) señales para regulación o protección de la informacion genética. En RNA: especialmente RNAt: pseudo-uridina, dihidro-uridina, quenosina (deriva de G) e hipoxantina (--> inosinato)
¿Qué proporciona la identidad química a los distintos AN? Es la secuencia de bases nitrogenadas (BN) la que proporciona la identidad química a los distintos AN.
Estructuras de losAN... Estructura primaria: estructura covalente y secuencia de nucleótidos. Est. secundaria: disposición de unos nucleótidos respecto a otros. Estructura terciaria: plegamiento de la cadena de AN.
La estructura secundaria del DNAbc presenta una conformación... Doble hélice tridimensional dextrógira: Doble porque es más estable que sencilla Estabilizada por puentes de H cooperativos intercatenarios (emparejamientos w y c).
La doble hélice de DNa presenta un diámetro de.. 2'37 nm
La doble hélice de DNa presenta un número de pares de bases/ vuelta de... 10'5 pb
La doble hélice de DNa presenta una distancia entre bases o nucleótidos de... 0'34 nm
las características de diámetro, distancia entre vueltas, números de pares de bases por vuelta y la distancia entre las bn y los nt, hacen que tenga una conformación... más flexible y estable que los DNA a y z
Las BN en la doble hélice quedan hacia el... interior (parte apolar o hidrófoba)
Los fosfatos y desoxiribosas de la doble hélice quedan hacia el... exterior parte polar o hidrofila de la cadena: solvatados con el agua.
A mayor cantidad de G=C (triple enlc)... mayor dificultad para separar las hebras.
las cadenas de la doble hélice son... Complementarias (A=T y G=C) y Antiparalelas (5'-->3' y 3' <-- 5') por lo que contienen distinta secuencia y composición
la secuencia complementaria de 5'-ApCpGpTpApT-3' es... 5'-ApCpGpTpApT-3' ACGTAT = 3' -TGCATA - 5'
En cada vuelta de hélice se aprecian dos surcos... Surco menor: 6 Angstroms: punto de contacto con histonas. siempre: 2-NH2 de guanina. Surco mayor: 13 Angstroms: interactúan distintas proteínas reguladoras. Siempre N7 de purinas.
En todos los DNA celulares (independientemente de la sp), el número de Adeninas y el de Guaninas es igual al ... Número de Timinas y al de citosinas respectivamente. A/T y G/C = 1 purinas = pirimidinas por tanto: el %A+%G+%C+%T = 100%
Entre las tres formas primarias, canónicas o convencionales del DNa celular, el DNA tipo B es... es la forma predominante in vivo y la más estable con 10'5 pb/vuelta y la desoxirribosa presenta conformación C2' endo.
Entre las tres formas primarias, canónicas o convencionales del DNa celular, el DNA tipo "z" es... levógiro, más estrecho y más largo. solo tiene un surco.
Entre las tres formas primarias, canónicas o convencionales del DNa celular, el DNA tipo "A" es.. parecido al B pero, más ancho y más corto y la desoxirribosa presenta la conformación C3' endo. la deshidratación favorece su aparición. presente en RNAbc y en híbridos RNA-DNA
la forma secundaria no canónica del DNA que se denominan como estructuras cruciformes bucles y horquillas) son... Secuencias cortas de 4 a 8 nt en las que el orden de pb es el mismo cuando se lee en sentido opuesto, guardan simetría se generan en zonas del dNA donde existan palíndromos (se lee igual al derecho que al revés)
la repetición especular indica que... la secuencia palindrómica está repetida y se encuentra en la misma hebra.
La repetición invertida hace referencia a que.. la secuencia palindrómica está repetida y en orientación inversa a la otra hebra.
las repeticiones invertidas o especulares son.. autocomplementarias y pueden dar lugar a estructuras cruciformes o en horquilla= interruptores moleculares para la replicación y transcripción.
El DNA deslizado son... secuencias incorrectamente apareadas por deslizamiento = se generan dos bucles de cadena sencilla en la doble hebra. DNA asociado a mutagénesis insercionales y de deleción en la secuencia.
la Ribosa del RNA presenta un grupo -OH en el C2', lo que implica ... 1) mayor inestabilidad de la cadena (el RNA es más lábil que el DNA) 2) los hidroxilos en C2' de la ribosa también pueden formar enlaces de H con otros grupos.
A lo largo de la cadena de RNA pueden observarse... - zonas bicatenarias: reg cortas con apareamiento intramolec: doble hélice. - protuberancias: hay una base no apareada en el lado de la hebra. - bucles: regiones no apareadas a ambos lados de la hebra. -horquillas_ bases complement que se aparean y están separadas por una región bucle no apareada.
a mayor cantidad de uniones G-C... mayor cantidad de triples enlaces, mayor cantidad de energía necesaria (Tª) para separar las dos hebras.
Cada DNA tiene una Tª de desnaturalización o fusión.. Tmelting: - Tª con la que se alcanza el punto medio de la transición entre bicat y monocatenaria en la desnaturalizació´n. -Tª con la que se consigue la mitad del efecto hipercrómico (punto inflexion de la curva. La Tm es inversamente proporcional al % de A=T y directamente proporcional al % de G=C
Qué nucleótidos pueden actuar cómo moléculas reguladoras.. AMPc y GMPc: segundos mensajeros en el interior de las células de procariotas y eucariotas.
Las fosfodiesterasas son... enzimas que permiten la regulacion de la concentracion intracelular de AMPc y GMPc. pueden inhibirse por Sildenafilo = Viagra --> favorece la erección del pene ¡!
las exonucleasas.. cortan los nucleótidos por los extremos
las endonucleasas... cortan por el interior de la hebra= enzimas de restricción previo reconocimiento de sitios de cortes específicos.
las restrictasas o enzimas de restricción... cortan los enlaces fosfodiéster del DNA a partir de una secuencia que reconocen que normalmente se compone de secuencias palindrómicas de 4 a 6 pb
las Enz de restricción se encuentran... En bacterias (no en eucariotas) y actúan como mecanismo de defensa: cuando la bact detecta material genético extraño (viral) 1)marca su propio DNA con metilasa y 2) libera enzimas de restricción que degradan el DNA foráneo pero no el propio (protegido por la metilación)
El conjunto formado por Metilasa + Enz restricción Sistema de modificación-restricción
Tipos de enzimas de restricción.. 1 y 3) actividad de modificación (metilan) y de restricción (cortan) antes o despues de la secuencia de reconocimiento (SR) necesitan ATP 2) solo actividad de restricción, cortan por dentro de la propia secuencia que reconocen y no necesitan ATP, si no, requieren Mg++ como cofactor.
tipos de cortes que producen las enzimas de restricción... a) extremos romos: más difíciles de unir posteriormente. b) Extremos cohesivos: por ejemplo EcoRI genera extremos salientes 5'. son más fáciles de unir posteriormente con DNA-ligasa
Un gen o cistrón se define como... unidad genética funcional situada entre dos locus. El genoma humano contiene entre 20mil o 30mil genes
un pseudogen es... una secuencia de DNA parecida a un gen conocido pero "afuncional". frecuentes en eudcariotas.
Un alelo es.. cada una de las dos o más alternativas que puede tener un gen.
los EXONES son... secuencias DNA que codificarán proteínas (se mantienen presentes en el mRNA --> proteínas) Constituyen ~10% del gen y solo <2% del genoma. El EXOMA: es la parte del genoma formado por exones (--> mRNA --> prots)
Los intrones son.. secuencias de gran tamaño interpuestas entre los exones que no se traducen. por eso los genes eucariotas no se corresponden completamente con las secuencias de aa que codifican. Histonas e Interferón alfa no contienen intrones.
El DNA extragénico = intergénico.. según el patron de repetición el DNA puede ser disperso o agrupado. mucho más abundante.
según el grado de repetición el DNA puede ser... 1. de copia única o poco repetitivo 2. moderadamente repetitivo (transposones) 3. altamente repetitivo o DNA de secuencia simple.
EJEMPLOS Del DNA altamente repetitivo - DNA satélite: sec peqs <200pb asociadas a los telómeros y centrómeros. -en fx del número de pb: Satélite 100-200/ Minisatélite 10-100/ microsatélite STR <100pb - VNTR: repeticiones en tandem
Resumen distribución del genoma humano...
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