EL MICROSCOPIO

EL MICROSCOPIO SIOMARA LEON JESSICA ORDOÑES WENDY CAICEDO UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS VILLAVICENCIO/META 2015

INTRODUCCION El desarrollo de la práctica de laboratorio Nº 1 Conocimiento y manejo del microscopio del curso de biología tiene como propósito establecer un primer contacto con el microscopio a través de la observación de diferentes estructuras, para ello se requiere un conocimiento previo de las partes, tipos, defectos o aberraciones del microscopio. Es un instrumento que sirve para ver objetos demasiados pequeños para ser vistos con claridad por el ojo humano. Conoceremos en profundidad el microscopio las clases y sus partes, las funciones que este cumple y procedimiento que se debe llevar en el laboratorio con sustancias. En esta práctica utilizaremos un elemento esencial llamado microscopio el cual conoceremos e identificaremos sus partes, los cuidados que se debe tener para su manejo y los procesos que se deben llevar en una buena práctica. Para ello debemos conocer un poco más a fondo sobre el del microscopio.

OBJETIVOS · Conocer e identificar las partes del microscopio óptico · Conocer los cuidados del microscopio para su buen manejo · Aprender y practicar el proceso de enfocar correctamente en el microscopio óptico

MICROSCOPIO Instrumento óptico para ampliar la imagen de objetos o seres, o de detalles de estos, tan pequeños que no se pueden ver a simple vista; consta de un sistema de lentes de gran aumento. HISTORIA El microscopio fue inventado por un fabricante de anteojos de origen holandés, llamado Zaccharias Janssen, alrededor del año 1590.A mediados del siglo XVII un holandés, Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación científica, puede considerarse el fundador de la bacteriología.

Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por asociación de Chris Neros y Flint Crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta época son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones adecuadas de dos o más medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes.TIPOS DE MICROSCOPIO Hay dos grandes tipos de microscopios según su funcionamiento básico: MICROSCOPIOS ÓPTICOUn microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticos. También se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Antón van Leeuwenhoek.Algunos son: · De campo claro · De campo oscuro · De contraste de fase · De luz ultravioleta · De fluorescencia · Estereoscopio DIFERENCIASCOMPUESTO1. Visión es un solo plano2.aumento de 100x3.son especiales para examinar objetos transparentesESTEREOSCOPIO1. Visión a través de dos lentes 2.Poder de aumento 45x3.Son muy útiles en el campo de la saludPartes esenciales que componen un microscopio óptico: Parte mecánica · Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de iluminación. Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas escalas que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está observando. La platina presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que permiten

· desplazar la preparación sobre la platina, en sentido longitudinal y transversal respectivamente. · Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte de oculares y objetivos. · Revólver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos, y que rota para poder utilizar uno u otro, alineándolos con el ocular. · Brazo o asa: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque asociados al tubo o a la platina. La unión con la base puede ser articulada o fija.

·Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina o el tubo hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico permite desplazamientos amplios para un enfoque inicial y los micrométricos desplazamientos muy cortos, para el enfoque más preciso. Pueden llevar incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el tubo a una determinada altura. Parte óptica · Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos (normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o binoculares.· Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del tubo, mediante el revólver. En esta estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados de forma creciente según sus aumentos, en el sentido de las agujas el reloj). Un anillo coloreado es distintivo de los aumentos de cada objetivo, que también van reseñados en el lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la preparación al aire, y se deben de utilizar con un aceite de inmersión (normalmente van marcados con un anillo rojo).

· Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que envía los rayos luminosos hacia la platina. · Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para regular la intensidad de la luz. · Diafragma o iris: El diafragma de un microscopio, también conocido como el iris, es un disco giratorio que se puede ajustar para permitir que pase más o menos luz con el fin de proporcionar una iluminación adecuada a la muestra.El diafragma del microscopio tiene una función similar a la apertura de una cámara o el iris de un ojo humano. En función del tipo de muestra y de la luz ambiental del entorno, es posible que desees tener más o menos luz brillante sobre tu muestra. El diafragma se puede ajustar para permitir más o menos luz en el portaobjeto. · Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menor contraste. Se regula en altura mediante un tornillo. El condensador enfoca la luz de la lámpara del microscopio sobre la muestra montada. Se coloca debajo de la platina del microscopio, y se puede ajustar para mayor claridad, contraste e iluminación. Aprende a utilizar correctamente un condensador de microscopio para ver una muestra con óptima nitidez

MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS El microscopio electrónico utiliza lentes electrostáticos y electromagnéticos y a través de los electrones ilumina un objeto, magnificando una imagen hasta 2 millones de veces mientras que la luz del microscopio lo hace solo 2 mil veces. El microscopio electrónico utiliza una onda larga de un electrón llamado Broglie wavelength. Al controlar el rayo de la radiación electromagnética el microscopio electrón hace posible focalizarse, produciendo una imagen de gran escala. Entre ellos estan: · Electrónico de trasmisión · Electrónico de barrido ABERRACIONES Los instrumentos ópticos causan en las imágenes ciertos defectos o aberraciones. Las aberraciones no se deben a defectos de construcción, sino que son una consecuencia de las leyes de la refracción-reflexión de la luz. En los microscopios suceden aberraciones cromáticas y de esfericidad. Aberración cromática Se origina debido a que la luz no es monocromática (vibraciones de la misma frecuencia). Los distintos colores de la luz tienen distintas velocidades dentro del material de las lentes y por lo tanto distinto índice de refracción (cambio de dirección). La distancia focal depende del índice de refracción. Cada color tiene un foco distinto y experimenta una desviación distinta. Esto hace que la imagen no se forme en un único punto y aparece una distorsión. Este defecto se corrige combinando adecuadamente una lente convergente con otra divergente de distinto índice de refracción. Los espejos no producen esta aberración porque en ellos no hay refracción. Aberración esférica La aberración esférica ocurre cuando la luz que pasa a través de la periferia del lente no se lleva a foco en el mismo plano que la que viaja a través del centro del lente

Cuando la luz pasa a través del lente, los rayos que pasan cerca del centro del lente son refractados a un menor grado que las ondas pasando a través de la periferia del lente. Esto resulta en la producción de diferentes puntos focales junto con el eje óptico y resulta en la perdida de resolución. PREPARACIONES O MUESTRAS: Se conocen dos tipos de muestras biológicas: Preparaciones en fresco o en vivo: Las preparaciones en fresco permiten visualizar los microorganismos sin necesidad de fijarlos ni teñirlos, y por tanto vivos. Las preparaciones al fresco o in vivo son muy fáciles de realizar; se prepara una disolución acuosa donde se introduce el microorganismo, se pone una gota en un porta, se tapa con un cubre y se observa. Se emplean para observar la morfología de bacterias, especialmente de espiroquetas. Sirve también para observar la movilidad de las bacterias y para observar cambios citológicos; mitosis, esporulación, etc. Preparaciones fijadas y teñidas: Las preparaciones fijadas y teñidas son las más utilizadas en Microbiología por dos razones: ü La tinción facilita la visualización de la bacteria ü Con varios colorantes clasificamos la bacteria en distintos grupos. La mayor desventaja es que la bacteria ya está muerta. Algunos métodos para realizar esta preparación son: · Tinción Simple: con azul de metileno. Todas las bacterias aparecen teñidas de azul. · Tinción de Ziehl-Neelsen: Este método se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las micro bacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. · Tinción de Gram: Debe su nombre al Bacteriologo Danés Christian Gram que la desarrollo en 1844. Es una tinción diferencial, clasificando a las bacterias en Gram + y Gram -, de acuerdo a las propiedades de su pared celular: Preparación: 1º Fijamos la muestra mediante calor. 2º Violeta cristal (Tiñe todas las baterías, gram + y -) 1´´ 3º Fijamos con Lugol, 1´. 4º Decoloremos con una mezcla alcohol-cetona (los gram - se decoloren).10´´ 5º Safranina (colorante de contraste, tiñe a los gram -), 30´´ Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativos. En la tinción se observarán de color azul-violeta las gram + y de color rosa las gram -.

Por su naturaleza los microscopios electrónicos no pueden hacer muestras in vivo ya que se requieren técnicas especiales de cortes ultrafinos, y las células primero deben ser fijadas (en el método de fijación y teñido el microorganismo ya está muerto) y deshidratadas. MEDIOS DE INMERSION Para una alta potencia de resolución, la apertura numérica (NA) de un objetivo debe ser mayor de uno. Esto requiere un medio de inmersión con un índice de refracción mayor de uno, es decir, que no sea el aire. Los medios de inmersión comunes son aceite, agua y glicerol. El medio de inmersión que debe utilizarse con cada objetivo concreto se indica en el objetivo. Aceite de inmersión Mediante los aceites de inmersión se elimina casi completamente la desviación de los rayos de luz y se aumenta considerablemente la eficacia de los objetivos de microscopios. BIBLIOGRAFIA http://tecnicaenlaboratorios.com/Nikon/Info_aberracion_esferica.htm http://teleformacion.edu.aytolacoruna.es/FISICA/document/fisicaInteractiva/OptGeometrica/aberracions/aberracions.htm#aEsfercia https://www.google.com/imghp?hl=es-419&gws_rd=ssl https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio_%C3%B3ptico https://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica3.htm http://www.ehowenespanol.com/utilizar-condensador-microscopio-como_383322/ http://www.ehowenespanol.com/diferencias-microscopio-electronico-microscopio-luz-lista_168030/ http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMicroscopia.htm http://microbiologiaseminario4.blogspot.com/2009/05/vale.html http://www.tiposdemicroscopio.com/electronico_escaneando/ http://www.leica-microsystems.com/es/productos/objetivos/etiquetado-de-objetivos/medios-de-inmersion/ Guía de laboratorio nº 1