Biotecnologia

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Biotecnologia	1a Aula
Como abrir a fita de DNA?	Em condições normais a abertura ocorre pela elicase, no entanto, como é caro para uso laboratorial, apenas aquecer faz a abertura da fita.
Porque utilizar PRIMER?	O primer é um iniciador para que a DNA polimerase inicie o trabalho.
Para formar a fita complementar o que fornecer?	Deve-se fornecer nucleotídeos
O que é a DNA polimerase?	Na biologia molecular, as polimerases de DNA são enzimas que sintetizam moléculas de DNA de desoxirribonucleótidos, os blocos de construção do DNA. Essas enzimas são essenciais para a replicação do DNA e geralmente trabalham em pares para criar duas cadeias de DNA idênticas a partir de uma única molécula de DNA original. Durante este processo, a polimerase de DNA "lê" as vertentes de DNA existentes para criar duas novas vertentes que combinam as existentes.
taq Polimerase	Taq DNA Polimerase é uma enzima termoestável isolada da bactéria termofílica Thermus aquaticus (vive 72°C) e expressa em bactérias Escherichia coli. Esta enzima recombinante é constituída por uma cadeia polipeptídica com o peso molecular de aproximadamente 94 kDa apresentando as atividades de 5’→3’ DNA polimerase e 5´→3´ exonuclease. Não possui atividade 3'→5' exonuclease (proofreading). Ideal para reações de PCR
O que são sequências palindromes	são sequências de desoxirribose que se você ler de cinco linhas para três linhas da fita superior ela igual Leno da linha inferior de cinco linhas para três linhas
1.O que é Biotecnologia?	É a Utilização de agentes biológicos ou partes destes afim de gerar produtos e serviços tendo como base princípios científicos e de engenharia.
2.Tecnologia do DNA recombinante - Engenharia genética	É o termo usado para descrever algumas técnicas modernas em biologia molecular afim de mudar a constituição genética das células vivas de tal modo que estas possam produzir novas substâncias.Há o melhoramento tradicional (por cruzamentos) mas tem como problema que não se recombina apenas o que quer mas tudo. Na engenharia genética o caracteristica desejado e recombinado de forma mais precisa.
3.O que é DNA recombinante?	É um DNA hibrido não natural de duas fontes diferentes.
4.Do que precisa para fazer DNA recombinante?	De inicio duas enzimas, chamadas enzimas de restrição, com função de endonuclases e exonuclease e DNA ligase que forma a ligação de fosfodiéster. Em bactérias serve como proteção contra o DNA invasor. Ela distingue o seu material genético do invasor porque o seu DNA está metilado, função realizada pela enzima metilase.
5.O que são enzimas de restrição?	As enzimas de restrição ou endonucleases de restrição como também são conhecidas, são enzimas que cortam a molécula de DNA através do reconhecimento de sequências nucleotídicas específicas.
6.Em condicoes normais, onde agem as enzimas de restrições?	Agem apenas no DNA invasor.
7.Sitio de restrições	Quebra por hidrolise a ligação fosfodiester e as ligações de H se quebram consequentemente.
8.Quantos tipos de enzimas de restrições existem?	Existem três tipos. A do tipo 2ª mais importante. Esta reconhece de 4 a 8 pares de bases em sequencias palindrômicas.
9.Enzimas de restrição tipo I	Possui 3 subunidades. Uma de restrição, metilação e reconhecimento. A seguencia e assimétrica e local de hidrolise não é especifico. Este ocorre sempre em locais diferentes e precisa de ATP.
10.Enzimas de restrição tipo II	Utiliza duas enzimas, uma de restrição (endonuclease) e uma de metilação. A hidrolise ocorre dentro da sequencia palindrômica, não necessita de ATP e apenas de Mg+.
11.Enzimas de restrição tipo III	2 subunidades, uma de restrição e uma de metilação e reconhecimento (MS). A sequencias é assimétrica (5 a 7bp), dupla cadeia de DNA hemimetilada, sendo local de hidrolise 24 a 26 bp de distancia. A hidrolise é sempre em local diferente e necessita de ATP.
12.Quantos tipos de corte?	Um tem espaço de fita simples (corte coesivo) e outro não (corte cego). O corte coesivo deixa uma fita simples que pedem comparativas. A de corte cego não tem.
O que é transfecção	é a introdução de DNA em células eucarióticas. Ocorre de duas maneiras. transiente ou temporária OU estável ou permantente. A 1ª nao se integra ao cromossomo. A 2ª se integra ao cromossomo.
O Vetor pode ser:	Um vírus ou Um plasmídeo
Diferentes classes de bacteriofagos podem carregar tamanhos diferentes de insertos de dna doador

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