Metodologia Convencional de Salmonella

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• Metodología Convencional para Salmonella

• Etapa analítica

• Etapa pre-analítica

• Etapa post-analítica

• Colección de muestra

• Transporte

• Contenedor isotérmico previamente enfriado, la temperatura tiene que mantenerse de 4-8°C.

• Asépticamente Uso de guantes Cubrebocas Utensilios estériles

• Embalaje: Frasco de boca ancha o bolsa Stomacher estéril.

• Datos: fecha de toma de muestra, lugar de origen, tipo y numero de muestras, lugar de destino (nombre y dirección del laboratorio receptor) y análisis requeridos.

• Coloque 25g de muestra en frasco. Agregar 225mL de caldo lactosa estéril y diluir completamente

• Preparación de la muestra

• Aflojar la tapa a 1/4 de vuelta e incubar durante 24h ± 2h a 36 °C ± 1 °C.

• Transferir 0.1mL del cultivo de pre-enriquecimiento a un tubo del 10mL de caldo RVS y 1mL a un tubo conteniendo 10mL de caldo MKTTn.

• Incubar el caldo RVS a 41.5 °C ± 1 °C por 24h ± 3h y el caldo MKTTn a 36 °C ± 1 °C por 24h ± 3h.

• Aislamiento e identificación

• Agar XLD para el aislamiento de colonias típicas.

• ASB para aislamiento de colonias lactosa positivas

• Medio de cultivo complementario ej. Agar Verde Brillante.

• Colonias incoloras rosadas o fiusha, transparentes u opacas. 

• Colonias rosas con o sin centro negro.

• Colonias cafés, grises o negras.

• serología

• Detección de los antígenos Poly A-I & Vi

• Empleando una colonia pura no autoaglutinable, proceda, empleando una gota de la solución salina en una lámina de vidrio, disperse con el asa hasta obtener una suspensión homogénea y agregue una gota del antisuero O.

• Si se produce aglutinación, la reacción se considera positiva.

• Pruebas bioquímicas

• A partir del agar nutritivo, con un asa recta estéril, tocar ligeramente el centro de la colonia seleccionada e inocular en tubos de agar inclinado de TSI y LIA.

• Las colonias típicas de Salmonella spp, producen alcalinidad (color rojo) en la parte inclinada del medio y ácido (color amarillo) en el fondo;

• En LIA, Salmonella spp produce reacción alcalina (color púrpura) considerar como negativos los cultivos que produzcan claramente un color amarillo en el fondo del tubo. 

• Producción de gas y cerca del 90% de los casos producen H2S

• Seleccionar las placas que contienen menos de 150 UFC típicas, no mas de 300 UFC tipias y no tipicas. 

• Calcular N, como el número de UFC de Salmonella spp  positiva, presente en la muestra por mL o g, como la media de dos diluciones sucesivas utilizando la siguiente ecuación:

• N =     Ea .          V(n1 + 0.1 n2) d

• Reporte 

• Los cultivos determinados como presuntivos con las pruebas bioquímicas y confirmados por la serología, informar como: Salmonella spp en 25g:         PRESENCIA.

• Placas con agar XLD, ASB y el tercer medio selectivo sin desarrollo y/o colonias atípicas, informar: Salmonella spp en 25g:         AUSENCIA.

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